新型高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒株全长cDNA克隆的构建与分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王松豪

作者： 王松豪;郑海学;杨帆;曹伟军;刘芳;张艳;刘华南;郭建宏

作者机构：

关键词： 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒;基因组全长cDNA克隆;感染性分子克隆;序列分析

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2013 年 05 期

页码： 458-465

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了获得高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)弱毒株的全基因组序列和病毒基因组全长cDNA克隆,根据高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株(EF635006)和经典CH-1a株(AY032626)全基因组序列设计并合成特异引物,进而用RT-PCR分6段扩增了HP-PRRSV弱毒株的全基因组。将扩增的各个cDNA重叠片段分别克隆到pMD20-T载体中,建立了PRRSV弱毒株的初级cDNA克隆,并对基因组cDNA序列进行了测定。根据测序结果,选择特异的酶切位点,将各个亚克隆产物逐段亚克隆入经过改造的低拷贝pOK12载体中,通过引入MluⅠ和EcoRⅠ酶切位点将聚合酶Ⅱ、Ⅰ和T7启动子序列及榔头锤酶基因置于病毒基因组的5′端,引入NotⅠ和FseⅠ将聚合酶Ⅱ、Ⅰ终止子序列及戊型肝炎病毒核酶基因置于病毒基因组的3′端,结果得到了病毒基因组全长cDNA克隆ppAPRRSVOK12。测序结果表明,该毒株基因组全长15 319bp[不包括poly(A)尾];全基因序列比对结果显示,该毒株属于北美洲型毒株,与HuN4的同源性高达99.5%。测序及酶切鉴定结果证实,HP-PRRSV弱毒株基因组全长cDNA克隆已构建成功。

分类号： S852.659.6

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