新型番鸭细小病毒Rep蛋白羧基端亚片段的原核表达及多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 胡非凡

作者： 胡非凡;梁齐章;黄瑜

作者机构：

关键词： 新型番鸭细小病毒;Rep蛋白;间接免疫荧光试验;免疫印迹试验

期刊名称： 福建农业学报

ISSN： 1008-0384

年卷期： 2023 年 008 期

页码： 889-893

收录情况： CSCD

摘要： 【目的】获得特异性识别新型番鸭细小病毒（New-genotype muscovy duck Parvovirus,N-MDPV）Rep蛋白羧基端亚片段的多克隆抗体。【方法】通过蛋白序列分析，选取N-MDPV Rep羧基端亚片段区域487～627 aa，后全基因合成序列，并在其C末端添加His-tag标签，利用无缝克隆的方法，将该段基因克隆至pET-28a（+）载体，随后转化Rosetta（DE3）大肠杆菌，诱导表达得到重组蛋白。利用镍柱亲和层析技术纯化表达重组蛋白，将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔，制备针对Rep蛋白羧基端亚片段的多克隆抗体。【结果】构建了pET-28a-Rep-487-627原核表达质粒，纯化表达了该重组蛋白。SDS-PAGE结果表明该重组蛋白分子大小约24 kDa，主要以可溶性形式表达。间接免疫荧光和免疫印迹试验表明制备的多克隆抗体能与细胞内过表达的N-MDPV Rep蛋白特异性反应。【结论】制备的Rep多克隆抗体具有良好反应特异性，可识别Rep蛋白的构象表位和线性表位，满足进一步研究的需要。

分类号： S852.65

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