RT-PCR法分离伊氏锥虫VSG基因的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 周金林

作者： 周金林;沈杰

作者机构：

关键词： 伊氏锥虫;VSG基因;分离

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 11-3439/S

年卷期： 2000 年 03 期

页码： 277-280

收录情况： 北大核心

摘要： 应用异硫氰酸胍一酚一氯仿一步法分离伊氏锥虫安徽株克隆虫体ShTatl的二个抗原变异体ShTat1 3和ShTat1 5总RNA ,在含有甲醛的琼脂糖凝胶电泳后 ,转印到硝酸纤维膜上。根据布氏锥虫VSGmRNA3’端保守序列 ,设计合成了一个互补于它的含十八个碱基的寡核苷酸 5’—GGTGTTAAAATATATCAG— 3’ ,经32 P标记 ,Northern杂交 ,首次证明伊氏锥虫含有同样的保守序列。利用合成的十八碱基寡核苷酸作为反转录特异引物 ,成功合成cDNA第一链 ,以cDNA第一链作为PCR扩增模板 ,均能特异性的扩增出一条主带为 1 5kb的DNA ,与VSG基因大小相符。根据所有锥虫mRNA在 5’端的保守序列 ,设计合成了RT -PCR下游引物 5’—GAACAGTTTCTG TACTATATTG— 3’。对伊氏锥虫安徽株克隆虫体的二个变体ShTat1 3和ShTat1 5的RNA ,进行RT—PCR扩增 ,均特异性地分离出VSG基因 ,二个变异体VSG基因大小差异显著 ,其中ShTat1 3的VSG基因为 1 7kb ,而ShTat1 5的VSG基因则为 1 4kb。

分类号： S852.7

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