绿色荧光蛋白在IGF2b基因慢病毒载体感染鲤受精卵中的标记效果

文献类型： 中文期刊

第一作者： 苏胜彦

作者： 苏胜彦;陈为先;马佳璐;张勇;胡鹏晨;闻剑旻;张成锋;董在杰;袁新华;徐跑

作者机构：

关键词： 绿色荧光蛋白;慢病毒载体;IGF2b;标记效果

期刊名称： 上海海洋大学学报

ISSN： 1674-5566

年卷期： 2012 年 21 卷 03 期

页码： 331-336

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以水母绿色荧光蛋白基因为模板进行PCR扩增得到目的基因(Green fluorescence protein,GFP),然后加上酶切位点BamHI和NheI,构建pLenti6.3-IRES-EGFP载体,转染DH5α感受态细胞进行菌落PCR,取阳性进行酶切鉴定,再取呈阳性的质粒进行测序,使用浓度为1μg/μL的质粒与慢病毒表达载体进行连接,通过荧光显微镜观察到绿色荧光,表明本实验获得的GFP和慢病毒载体整合成功;用此转染293T细胞,通过荧光显微镜同样检测到了绿色荧光。使用建鲤的组织提取RNA,然后按照Fermentas公司的M-MLV操作说明书进行反转录,得到IGF2b基因后加酶切位点进行扩增,将IGF2b整合到用GFP作为标记基因的慢病毒载体上,再以此转染建鲤未分裂的受精卵,48 h后通过荧光显微镜也观察到了绿色荧光蛋白的表达。试验表明绿色荧光蛋白在IGF2b基因慢病毒载体感染鲤受精卵中的标记是成功的。这些结果为基于含有GFP慢病毒转基因鱼育种技术的开发奠定了基础。

分类号： S917.4

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