基于CRISPR-Cas9技术建立CSE1L基因敲除C2C12细胞

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李紫馨

作者： 李紫馨;白鸿飞;谢勇;李珣;白立景

作者机构：

关键词： CRISPR-Cas9;CSE1L;基因敲除;骨骼肌发育

期刊名称： 中国农业科技导报

ISSN： 1008-0864

年卷期： 2024 年 26 卷 011 期

页码： 225-233

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研究染色体分离样蛋白1(chromosomesegregation 1-like,CSE1L)在小鼠骨骼肌发育中的作用，利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建CSE1L基因敲除的C2C12细胞系。针对小鼠CSE1L的第3外显子设计3组sgRNA，构建sgRNA表达质粒（连接绿色荧光蛋白，green fluorescent protein,GFP）和Cas9质粒（连接红色荧光蛋白，red fluorescent protein,RFP）共转染C2C12细胞，筛选高切割效率的sgRNA；将转染该sgRNA和Cas9的C2C12细胞进行流式细胞分选，获取共表达红、绿双色荧光蛋白的细胞，并用DNA测序进行鉴定。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹（Western-blot）鉴定其分子特征。最后分别利用CCK-8、细胞周期以及凋亡实验对CSE1L敲除细胞系活力和凋亡进行检测。结果显示，小鼠成肌细胞中CSE1L基因mRNA和蛋白水平表达量都显著降低（P<0.01），提示CSE1L基因敲除成功。该基因缺失导致C2C12细胞变细长、细胞活力在72 h显著下调，细胞周期停滞、凋亡增加。成功构建了CSE1L基因敲除的细胞系，并研究了小鼠骨骼肌细胞生长发育相关功能，为探索CSE1L基因功能提供细胞模型，并为后续基因编辑敲除鼠制备奠定基础。

分类号： Q78

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