猪肺炎支原体解螺旋酶RuvA的原核表达、多克隆抗体制备及活性鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 谢青云

作者： 谢青云;邢蕙萱;于岩飞;袁厅;熊祺琰;熊富强;冯志新

作者机构：

关键词： 猪肺炎支原体;解旋酶RuvA;DNA结合;多克隆抗体

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2024 年 55 卷 001 期

页码： 271-281

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 猪肺炎支原体的持续性感染问题频发,同源重组介导的抗原变异扮演重要角色.解螺旋酶RuvA调节霍利迪连接体变构是参与同源重组的关键步骤.鉴于此,本研究旨在原核表达猪肺炎支原体解螺旋酶RuvA重组蛋白,鉴定其DNA结合活性并制备多克隆抗体.试验通过分子克隆构建原核表达质粒pET21a-RuvA,经诱导表达和纯化获得RuvAMhp重组蛋白;免疫家兔制备抗RuvAMhp多克隆抗体,再利用间接ELISA和Western blot试验进行效价测定和特异性验证;利用凝胶迁移试验结合表面等离子共振技术分析RuvAMhp的DNA结合活性;利用凝胶迁移试验结合Western blot试验鉴定RuvAMhp的寡聚特性.结果显示:原核表达的RuvAMhp重组蛋白约为26 ku;制备的抗RuvAMhp多克隆抗体效价为1∶256 000,且具有良好的特异性;RuvAMhp具有较强的DNA结合活性,对霍利迪连接体的亲和力高达624.4 pmol·L-1(KD),并且主要以八聚体形式与其形成稳定复合物.通过Ru-vAMhp的原核表达、多克隆抗体制备及活性鉴定,为后续探索RuvA调解同源重组介导猪肺炎支原体抗原变异的分子机制奠定了基础.

分类号： S852.62

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