马乙型脑炎病毒E蛋白的原核表达及间接ELISA的初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王宇

作者： 王宇;田志革;欧阳凤菊;郭巍;相文华;王世泽;曲娟娟

作者机构：

关键词： 马乙型脑炎;E蛋白;原核表达;间接ELISA

期刊名称： 免疫学杂志

ISSN： 1000-8861

年卷期： 2010 年 07 期

页码： 73-76+80

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的原核表达马乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)E蛋白,建立JEV间接ELISA诊断方法。方法根据GenBank(AF315119.1)公布的JEVSA14-14-2株E蛋白基因序列设计一对引物,提取病毒RNA经反转录和RT-PCR扩增获得E蛋白编码基因片段,将该片段插入表达载体pET30a(+),转化BL21(DE3)后经IPTG诱导蛋白表达,Western blot检测活性,以表达的E蛋白为包被抗原建立间接ELISA诊断方法。结果获得约1500bp目的片段,与GenBank上的序列同源性100%,其表达产物相对分子质量约为60000,Western blot结果显示该蛋白可与JEV阳性血清结合,具有免疫反应性。建立了间接ELISA检测方法,对不同省份的340份马血清进行检测,其中154份为阳性。结论原核表达JEV的E蛋白具有良好的免疫活性,建立的间接ELISA诊断方法特异性和灵敏性较好,可用于JEV的现地检测。

分类号： S852.65

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