感染高粱花叶病毒甘蔗叶片cDNA文库构建及评价

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张雨良

作者： 张雨良;张树珍;王健华;熊国如;王俊刚;余乃通;刘志昕

作者机构：

关键词： 高粱花叶病毒;甘蔗;酵母双杂交文库;构建

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2012 年 33 卷 06 期

页码： 1096-1100

收录情况： CSCD

摘要： 为了研究甘蔗花叶病与甘蔗寄主致病的互作分子机制,利用SMART技术成功构建了感染高粱花叶病毒甘蔗叶片的cDNA文库,用于后续酵母双杂交互作蛋白筛选试验。采用Omega公司Plant RNA Kit提取感染高粱花叶病毒甘蔗叶片总RNA,经过Oligotex纯化获得mRNA,将其反转录成cDNA第一链,再在DNA聚合酶作用下,通过长距离PCR扩增双链cDNA。经SfiI酶切并去除短片段后,连接到pGADT7-SfiI载体上,成功获得初级cDNA文库,最后以初级文库100万克隆为基数扩增,得到扩增文库并提取质粒。经检测构建的文库容量为1.6×106cfu,文库滴度2.2×106cfu/mL,文库cDNA插入片段长度主要分布在700～2 000 bp,文库重组率约为96%。结果表明,该文库质量较好,为筛选分离抗病功能基因及开展寄主与病毒互作的研究奠定了基础。

分类号： S435.661

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