检测大肠杆菌内c-di-GMP水平的双荧光素报告质粒的构建及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张贝贝

作者： 张贝贝;胡剑刚;王欣宇;郭伟奇;姚澜;王芷洋;王帝;祁晶晶;田明星;鲍衍清;王少辉

作者机构：

关键词： 环二鸟苷酸;核糖开关;双荧光素报告质粒;检测

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2023 年 012 期

页码： 4814-4822

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 细菌通过调控第二信使环二鸟苷酸（cyclic diguanylate, c-di-GMP）而促进其适应环境、存活及致病。【目的】本研究旨在建立有效的c-di-GMP水平检测方法，为大肠杆菌内c-di-GMP水平检测提供便利条件。【方法】根据c-di-GMP核糖开关受体的调控方式、荧光报告基因等设计引物，通过重叠聚合酶链反应（overlap polymerase chain reaction, overlap PCR）和同源重组酶构成基于核糖开关的双荧光素报告质粒pAmCherry-Vc2EGFP（pACVcE），然后构建c-di-GMP代谢基因过表达菌株和缺失菌株，利用pACVcE检测大肠杆菌内c-di-GMP水平。【结果】OverlapPCR扩增产物与目的靶序列一致，测序结果证明pACVcE序列正确。表达c-di-GMP合成酶DgcZ的大肠杆菌胞内c-di-GMP水平显著升高，而表达c-di-GMP降解酶PdeK的大肠杆菌胞内c-di-GMP水平显著降低。禽致病性大肠杆菌的胞内c-di-GMP水平检测发现c-di-GMP降解酶基因pdeK缺失后胞内的c-di-GMP水平显著升高。【结论】本研究构建了基于核糖开关的双荧光素报告质粒，可方便、快速检测大肠杆菌胞内c-di-GMP水平。

分类号： R446.5

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