用于DNA转染的PRRSV全长感染性cDNA克隆改建及应用

文献类型: 中文期刊

第一作者: 刘长龙

作者: 刘长龙;李燕华;袁世山

作者机构:

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒;全长感染性cDNA克隆;HDV核酶;DNA转染

期刊名称: 安徽农业科学

ISSN: 0517-6611

年卷期: 2010 年 38 卷 23 期

页码: 12891-12894+12897

收录情况: 北大核心

摘要: [目的]利用核酶自我剪切功能使PRRSV的基因组获得1个精确的基因组3′末端,提高全长感染性cDNA克隆的病毒拯救效率。[方法]用3步PCR方法将获得含有丁型肝炎病毒核酶序列的片段并将其克隆到PRRSV全长cDNA克隆pAPRRS的poly(A)下游,再通过酶切,连接将牛生长激素多聚腺甘酸转录终止序列插入到核酶序列后,构建成全长感染性cDNA克隆pAPRRS-HB,新构建的克隆转染MARC-145细胞,72h后用间接免疫荧光检测病毒N蛋白和非结构蛋白2(nsp2)的表达,并检测细胞上清中病毒的滴度。[结果]成功构建了含有核酶序列的PRRSV基因组全长感染性cDNA克隆pAPRRS-HB。新构建的全长感染性cDNA克隆能够较好地拯救出病毒,拯救效率比pAPRRS提高10倍左右。[结论]该结果为研究PRRSV基因结构与功能奠定了基础。

分类号: S858.28

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[1]用于DNA转染的PRRSV全长感染性cDNA克隆改建及应用(英文). 刘长龙,李燕华,袁世山. 2010

[2]用于DNA转染的PRRSV全长感染性cDNA克隆改建及应用(英文). 刘长龙,李燕华,袁世山. 2010

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