缺失VIM基因大白猪肾成纤维细胞的构建及其NF-κB和MAPK信号通路的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李凯强

作者： 李凯强;王晶;肖伟;任红艳;华再东;董发明;毕延震

作者机构：

关键词： CRISPR/Cas9;VIM基因;敲除;NF-κB;MAPK

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN：

年卷期： 2022 年 009 期

页码： 970-976

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 波形蛋白（Vimentin,VIM）可介导多种病毒进入机体，为研究病毒的感染机理，本研究将合成的敲除VIM基因的双sgRNA克隆于pX459-puro载体中，构建pX459-puro-V-1和pX459-puro-V-2敲除载体，经电转至大白猪肾成纤维细胞中，经嘌呤霉素筛选出14株单克隆细胞株。将筛选的单克隆细胞株通过PCR鉴定、测序验证、western blot鉴定，结果显示得到1株缺失VIM基因的单克隆细胞。通过100 ng/mL的脂多糖（LPS）分别刺激该单克隆细胞株和可传代大白猪肾成纤维细胞，通过western blot检测NF-κB和MAPK信号通路中p65、p38、JNK、ERK及磷酸化蛋白p-p65、p-p38、p-JNK、p-ERK的表达水平，结果显示经LPS刺激后，缺失VIM基因的单克隆细胞和可传代大白猪肾成纤维细胞中p65、p38、JNK、ERK、p-ERK的表达水平均无明显变化；缺失VIM基因的单克隆细胞中p-p65、p-p38、p-JNK的表达水平明显低于可传代大白猪肾成纤维细胞（P＜0.01）。本研究得到了1株缺失VIM基因的单克隆细胞，利用该细胞株首次研究发现VIM基因缺失能够影响宿主细胞中NF-κB和MAPK信号通路中p-p65、p-p38、p-JNK的表达，从而起到降低炎症反应的作用，该缺失VIM基因的单克隆细胞为病毒感染机理的研究提供了良好的实验素材，对相关疫病的防控有重要意义。

分类号： S852.4

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