一株新型大口黑鲈双RNA病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 罗明菊

作者： 罗明菊;李宁求;林强;牛银杰;刘礼辉;梁红茹;罗霞;付小哲

作者机构：

关键词： 大口黑鲈;双RNA病毒;巢式RT-PCR;检测方法

期刊名称： 水产学报

ISSN：

年卷期： 2021 年 009 期

页码： 1584-1591

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为有效预防大口黑鲈双RNA病毒（largemouth bass birnavirus, LBBV）,实验针对LBBV保守基因VP1设计特异性引物,构建重组质粒pMD-LBBV-VP1,通过优化PCR反应条件,提高检测方法的灵敏度和特异性,建立了大口黑鲈双RNA病毒的巢式RTPCR检测方法,并采用该方法对实验室2017—2020年收集的304株样本进行检测。结果显示,巢氏引物F1/R1、F2/R2最佳工作浓度均为4×10-12 mol,最佳退火温度分别为64.1℃和61.5℃,当巢氏RT-PCR扩增35个循环时,可以检测质粒最低浓度为4.15个/μL拷贝数,最低模拟样品浓度为102 PFU/mL,与第1轮PCR相比,灵敏度均提高了10 000倍,同时检测9种不同病毒,仅LBBV出现明亮特异性条带,在304个样品中,第1轮PCR检出阳性样品14株,检出率为4.60%,巢式RT-PCR检出阳性样品28株,检出率为9.21%;本实验建立的巢式RT-PCR检测方法灵敏度高且特异性好,可用于LBBV的早期检测及防控。

分类号： S943

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