gfp/1uxAB双标记载体在抗线虫菌株BC2000中的转化及表达检测

文献类型： 中文期刊

第一作者： 周莉娟

作者： 周莉娟;郑伟文;谢联辉

作者机构：

关键词： 抗线虫菌;绿色荧光蛋白基因;荧光素酶基因;电转化;表达检测

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1006-1304

年卷期： 2004 年 12 卷 05 期

页码： 91-95

收录情况： CSCD

摘要： 以抗线虫(Alcaligenes faecalis)生防菌 BC2000为出发菌株,用带有 gfp/1uxAB 双标记基因的 pUTmini-Tn5转座载体,通过电转化法将 gfp 和 1uxAB 基因整合到 BC2000染色体上。转化子的最终筛选依赖于立体荧光显微镜对菌落的荧光检测,对筛选平板上的菌落进行荧光检测后获得发强烈绿色荧光的标记菌。并命名为 BC2001。PCR 结果表明,从 BC2001的基因组 DNA 中扩增出约700 bp的 gfp 基因片段。另外标记菌在共聚焦显微镜中观察发现,菌体形态与出发菌 YKT 相同,均为椭球形或短杆状;标记菌在 LB 培养过程中荧光素酶活性监测发现,在标记菌的对数生长期,荧光素酶活性快速增加,到了稳定期,由于细胞代谢活性下降导致荧光素酶活性降低,而对照的出发菌株整个生长过程均检测不到荧光素酶活性。这些结果表明,由启动子 psbA 控制的 gfp 和 1uxAB 融合基因成功地转化 BC2000并在标记菌 BC2001中得到高效表达。

分类号： S476`Q789

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