抗黄曲霉毒素合成中关键蛋白AFLP(OmtA)的单克隆抗体制备与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王婷

作者： 王婷;李培武;张奇;张文;张兆威

作者机构：

关键词： 黄曲霉毒素;AFLP;单克隆抗体;制备与鉴定

期刊名称： 中国油料作物学报

ISSN： 1007-9084

年卷期： 2017 年 04 期

页码： 551-555

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： AFLP(Omt A)蛋白是黄曲霉毒素合成晚期的关键酶。用大肠杆菌表达的重组SUMO-AFLP融合蛋白作为免疫原,免疫Balb/c小鼠,选取小鼠阳性血清的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选,筛选出可以稳定分泌抗AFLP单克隆抗体的杂交瘤细胞株。再用阳性细胞株制备腹水抗体,经辛酸-硫酸铵纯化抗体后,用间接ELISA、Western杂交等方法对抗体的特性进行鉴定。筛选出1株能稳定分泌抗AFLP单克隆抗体的细胞株3B4 3B10,亚类鉴定单抗为Ig G2a。间接ELISA法测定该细胞腹水抗体的效价为1∶256 000,Western杂交结果显示抗AFLP单克隆抗体能特异性识别AFLP重组蛋白及黄曲霉菌内的天然AFLP蛋白。用1μg·m L~(-1)单克隆抗体检测AFLP蛋白,其线性检测范围为1.259~57.335ng·m L~(-1),检测限为0.851ng·m L~(-1),R~=0.998 3。本文成功制备抗黄曲霉毒素合成中天然AFLP蛋白的单克隆抗体,特异性和灵敏度均较高,为进一步研究AFLP的表达及功能机制奠定了基础。

分类号： Q813.2

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