人D6S1043-1型STR质粒DNA标准物质的研制

文献类型： 中文期刊

第一作者： 严安心

作者： 严安心;陈静;刘洪迪;李永久;彭柱;赵禾苗;李亮;赵兴春

作者机构：

关键词： D6S1043基因座;STR;质粒DNA标准物质

期刊名称： 生物技术进展

ISSN： 2095-2341

年卷期： 2020 年 10 卷 006 期

页码： 630-636

摘要： 短串联重复序列(short tandem repeat,STR)是存在于人类基因组中的一类具有长度多态性的DNA序列,由含2~6个碱基对的重复单位串联构成.DNA STR分型检验是当前法庭科学进行个体识别和亲缘鉴定的主要依据.STR分型标准物质是DNA STR检验量值溯源的基础和关键物质,对其进行研究将极大推动我国法庭科学DNA STR检验的标准化进程.以STR基因座D6S1043为例,介绍人类基因组中STR序列的质粒DNA标准物质的制备过程.首先,合成包含13个重复单元([ATCT]13)的D6S1043序列(定义为D6S1043-1)并将其与pUC57载体连接构建重组质粒,制备质粒溶液.其次,通过酶切鉴定、Sanger测序、多种STR分型试剂盒的分型鉴定等方法检验DNA序列的准确性.再次,采用微滴式数字PCR方法(droplet digital PCR,ddPCR)检测质粒浓度,评估质粒溶液的均匀性和稳定性.最后,由8家实验室协作,测定浓度标准值,综合分析均匀性检验、稳定性检验、定值过程等引入的不确定度,得到总不确定度;由6家实验室协作,测定D6S1043-1的分型值.结果表明:该标准物质的均匀性、稳定性良好,在-20℃可保存6个月,在4℃可保存14 d;核酸拷贝数为(7.7±1.2)×103 copies·μL-1;在D6S1043基因座上的分型值为13.人D6S1043-1型STR质粒DNA标准物质[编号:GBW(E)091072]是我国法庭科学DNA检验领域首批有证标准物质之一,其研制过程为其他STR基因座的质粒DNA标准物质的研制提供了一定的借鉴.

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