SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测水泡性口炎病毒方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李嘉阳

作者： 李嘉阳;赵佳男;秦彤;季芳;李刚;王承民

作者机构：

关键词： 印第安纳型水泡性口炎病毒(VSV-IN);新泽西型水泡性口炎病毒(VSV-NJ);RT-PCR;实时荧光定量PCR;SYBR Green Ⅰ

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2022 年 02 期

页码： 152-161

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在建立一种快速、灵敏的用于诊断水泡性口炎的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法。通过RT-PCR分别扩增印第安纳型水泡性口炎病毒（VSV-IN）和新泽西型水泡性口炎病毒（VSVNJ）的G基因，然后将其连接到克隆载体pMD19-T上，构建质粒标准品pMD-VSV-IN-G和pMD-VSV-NJG。根据GenBank中VSV-IN和VSV-NJ的G基因保守序列设计引物，利用SYBR GreenⅠ法进行实时荧光定量RT-PCR，建立标准曲线，并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果，在拷贝数6.82～6.82×10~8copies/μL范围内，C_t值与质粒拷贝数的对数值呈良好的线性关系，pMD-VSV-IN-G标准曲线的R~2值为0.998 12,p MD-VSV-NJ-G标准曲线的R~2值为0.997 48；检测其他病毒均无特异性扩增曲线，特异性良好。pMD-VSVIN-G的检测灵敏度为6.82 copies/μL,pMD-VSV-NJ-G的检测灵敏度也为6.82 copies/μL，是普通RTPCR方法的10倍。用该方法对实验室保存的VSV-IN和VSV-NJ各5份攻毒小鼠样品进行检测，检测结果与普通RT-PCR检测一致。上述结果表明，本检测方法的建立对快速、灵敏鉴别诊断IN型和NJ型水泡性口炎病毒具有重要的应用价值。

分类号： S852.65

  • 相关文献

[1]猪轮状病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立. 陈小金,陈建飞,时洪艳,张志榜,冯力. 2010

[2]羊传染性脓疱病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立. 林裕胜,江锦秀,张靖鹏,江斌,游伟,胡奇林. 2018

[3]猪血清淀粉样蛋白3分子SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用. 郇贝丽,刘珂,马改妮,魏建超,邵东华,李蓓蓓,邱亚峰,石元元,马志永. 2017

[4]小反刍兽疫病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立. 李林杰,刘萍,马鹏,王悦萦,郭富城,马晓霞,周建华,柏家林. 2018

[5]木尔坦棉花曲叶病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法. 赵蕊,吕利华,陈婷,何自福,何余容. 2015

[6]甘蔗谷胱甘肽硫转移酶基因SoGST-1α的克隆与表达分析. 徐磊,姚艳丽,胡小文,邢淑莲,刘洋. 2015

[7]胡萝卜atp8基因的克隆表达及细胞质雄性不育的相关性研究. 张智,梁毅,刘小义,张洪伟. 2013

[8]不同含油量大豆成熟期胚抑制消减cDNA文库构建及其差异表达基因分析. 程金朋,陈波,徐有明,周新安,卢长明,魏文辉. 2007

[9]甘蔗谷胱甘肽硫转移酶基因SoGST-1a的克隆与表达分析. 徐磊,姚艳丽,胡小文,邢淑莲,刘洋. 2015

[10]热休克反应与哺乳动物高海拔(缺氧)适应. 王晓临,徐存栓,王修杰,王冬杰,王青山,张宝琛. 2007

[11]胡萝卜atp9基因的克隆表达及细胞质雄性不育的相关性研究. 张智,梁毅,丁海凤,张洪伟. 2012

[12]猪细环病毒k2型SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立. 陈如敬,黄秋宇,修金生,吴学敏,严山,车勇良,周伦江. 2016

[13]贝类中GⅠ、GⅡ诺如病毒快速检测与分群方法的建立. 苏来金,赵峰,马丽萍,周德庆. 2019

[14]基于SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR建立生乳及乳制品沙门氏菌快速检测技术. 张巧艳,陈亭亭,陈笑芸,杨胜利,缪青梅. 2012

[15]鸭冠状病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用. 高月花,朱彤,刘丽萍,郭效珍,马芹,胡峰,汪建华,于可响,黄兵,宋敏训,李玉峰. 2023

[16]SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测埃博拉病毒方法的建立. 刘阳,史子学,马玉堃,王皓婷,王宗尧. 2012

[17]Real-time RT-PCR检测J亚群禽白血病病毒的研究. 张在平,田进,孟庆文,马学恩. 2010

[18]基因Ⅶ型新城疫病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立. 孟春春,段云兵,仇旭升,金仕强,詹媛,张向乐,于圣青,丁铲. 2011

[19]绵羊肺炎支原体SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立. 林裕胜,江锦秀,张靖鹏,游伟,胡奇林. 2018

[20]小麦品种小偃22干旱诱导基因及其表达分析. 张宏,宋国琦,吉万全,胡银岗. 2009

作者其他论文 更多>>

微信小程序