产气荚膜梭菌α毒素-铁蛋白纳米颗粒抗原制备及其对小鼠的免疫原性评价

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵慧玉

作者： 赵慧玉;雷伊诺;幸倩如;张珊;张广智;蒋卉;沈青春;丁家波;姜世金;范学政

作者机构：

关键词： 产气荚膜梭菌;α毒素;铁蛋白;纳米颗粒;免疫原性

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2025 年 56 卷 009 期

页码： 4626-4637

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在制备产气荚膜梭菌α毒素-铁蛋白纳米颗粒抗原并评价其对小鼠的免疫原性.将带有D56G、H68G点突变和Spytag序列的α毒素全长基因和带有SpyCatcher序列的铁蛋白(Ferritin)基因片段分别克隆至原核表达载体pET 28a,后进行表达并对表达产物进行鉴定和纯化.对纯化后的αm2ST进行细胞毒性、卵磷脂酶活性以及溶血活性分析.将纯化的αm2ST和FeSC在体外对接,随后,将α毒素-铁蛋白(αm2-Fe)对接产物和αm2ST分别与佐剂混合后免疫小鼠.免疫后每周采集小鼠血清,检测IgG、IgG亚型抗体水平和中和效价,并在二免后28 d取脾细胞分析T细胞亚群和IFN-γ分泌水平.结果显示,在28 ℃条件下,αm2ST和FeSC均以可溶性表达为主.αm2ST未被检测出细胞毒性、卵磷脂酶活性和溶血活性,这说明αm2ST已无毒性.将αm2ST和FeSC体外对接后,经SDS-PAGE、TEM和DLS分析,证实αm2-Fe形成直径32.7~50.7 nm的纳米颗粒,主峰为37.8 nm.小鼠免疫后,αm2-Fe组能产生较高水平的IgG2a抗体(P<0.001);小鼠二免后21 d,αm2-Fe组血清中和效价为64倍,显著高于αm2ST组的32倍(P<0.05);二免后28 d,αm2-Fe组脾细胞刺激后上清中的IFN-γ也高于αm2ST组(P<0.05),流式细胞术分析显示αm2-Fe组产生了较高比例的效应性CD8+T细胞(P<0.000 1).小鼠试验证实αm2-Fe纳米颗粒抗原能有效刺激小鼠产生体液免疫和细胞免疫.

分类号： S852.616.3

  • 相关文献

[1]无毒性产气荚膜梭菌α毒素重组蛋白的自诱导分泌表达及免疫原性分析. 魏后军,范志宇,胡波,仇汝龙,陈萌萌,宋艳华,徐为中,王芳. 2022

[2]产气荚膜梭菌α毒素亚单位基因的表达及表达产物活性分析. 刘家森,刘怀然,陈洪岩,李一经. 2003

[3]Ⅱ型登革病毒铁蛋白纳米颗粒蛋白的真核表达、纯化及免疫效果评价. 鲍君铎,仇相书,高岩,张佳奇,李霄,金鑫,鲁会军,金宁一. 2024

[4]家禽坏死性肠炎疫苗的基础研究进展. 辜新贵,郑露,袁建丰. 2011

[5]产气荚膜梭菌α毒素和ε毒素的共表达及其免疫原性的研究. 韩广伟,李兆才,宫晓炜,陈启伟,曹小安. 2014

[6]D型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆与高效表达. 李娜,吴建勇,李建军,杨学云,王登峰,段新华,王治才. 2012

[7]功能化铁蛋白纳米颗粒疫苗的研究进展. 张荣,魏彦明,茹毅. 2024

[8]铁蛋白与口蹄疫病毒VP1在大肠杆菌中融合表达及纳米颗粒自组装. 张伟业,宋浩志,刘兴健,李轶女,张志芳. 2021

[9]登革病毒铁蛋白纳米颗粒抗原的表达与纯化. 鲍君铎,冯生,高岩,张佳奇,汪伟,李霄,李楠,金鑫,金宁一,鲁会军. 2023

[10]猪德尔塔冠状病毒S蛋白纳米颗粒的构建及免疫原性评价. 张晓蓉,吴建晓,高銘泽,高娜,陈建飞,冯力. 2024

[11]1株兔源A型产气荚膜梭菌毒力和免疫原性测定. 贾华强. 2024

[12]诺维氏梭菌α毒素单克隆抗体的制备与鉴定. 孟德志,邢斌,翁鸿宇,王秀媛,王芳,杨玲玲,柴同杰,韦良孟,戴培强. 2022

[13]A型魏氏梭菌毒素毒力测定替代试验. 薛家宾,陈兴祥,蔡吉日,徐为中,黄克和. 2002

[14]A型产气荚膜梭菌α毒素的提纯试验. 陈兴祥,薛家宾,黄克和,王启明,徐为中. 2002

[15]魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条的研制. 刘晓敏,柴同杰,邹明强,黄蓉,张明亮. 2012

[16]腐败梭菌α毒素蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立. 马清龙,赵佳慧,王武斌,李学瑞,孙雨,李斌,储岳峰. 2024

[17]转小麦铁蛋白基因酵母的抗氧化活性. 赵永亮,陈静,王丹,王卫国,李云辉. 2010

[18]转铁蛋白基因增强水稻对氧化胁迫与稻瘟病菌的抗性. 程志强,郭泽建,徐晓晖,柴荣耀,李德葆. 2003

[19]黄花苜蓿铁蛋白cDNA的克隆与序列分析. 郭长虹,王永斌,李丽娅,沙永群. 2009

[20]重组H5N1亚型流感病毒铁蛋白纳米粒mRNA疫苗的构建、表达及鉴定. 陈璐儿,庄忻雨,张桐,孙世宇,汪伟,曾博宇,于潼,鲁会军,田明尧,金宁一. 2021

作者其他论文 更多>>

微信小程序