文献类型： 中文期刊
第一作者： 张梦洁
作者： 张梦洁;王佳婧;何苗锋;刘润春;恽佳蕾;李文良;毛立;张纹纹;孙敏;程子龙;杨蕾蕾;储岳峰;赵茹茜;刘茂军
作者机构：
关键词： 绵羊肺炎支原体;Enolase蛋白;原核表达;间接ELISA
期刊名称： 中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2021 年 012 期
页码： 1490-1497
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 旨在建立一种检测绵羊肺炎支原体（Mo）血清抗体的间接ELISA方法,笔者构建了Mo Enolase基因原核表达载体,诱导表达后,纯化的重组蛋白用Western-blot分析其反应原性。以重组蛋白为包被抗原,建立了Mo间接ELISA抗体检测方法。结果显示,重组蛋白得到可溶性表达,Western-blot证实具有良好的反应原性。间接ELISA反应条件优化结果显示,包被抗原浓度为2 mg/L,37℃2 h,封闭条件为含10 g/L BSA的PBS,4℃过夜,待检血清稀释度为1∶50,37℃1 h,酶标二抗最佳稀释度为1∶4 000,37℃1 h,底物最佳显色条件为37℃避光10 min。分别利用38份阴性血清、38份阳性血清确定临界值为S/P=0.365。用该方法与间接血凝法对180份血清进行检测,两者符合率为81.11%。结果表明,本研究建立的间接ELISA方法敏感、特异,具有良好的临床应用前景。
分类号： S858.26
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