正交法整体优化差异显示反应体系

文献类型： 中文期刊

第一作者： 柳淑芳

作者： 柳淑芳;杜立新;朱靖;王爱华;李宏滨

作者机构：

关键词： DDRTPCR;正交优化;非变性PAGE;银染;反向Northern

期刊名称： 遗传

ISSN： 0253-9772

年卷期： 2004 年 26 卷 06 期

页码： 836-840

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： mRNA差异显示PCR(mRNAdifferentialdisplayPCR ,DDRT PCR)是分离差异表达基因的有效方法 ,但该方法的准确性极易受到外部因素和内部因素的影响。采用正交法优化DDRT PCR反应条件 ,充分考虑到模板浓度、锚定引物浓度、随机引物浓度、dNTPs浓度、镁离子浓度以及Taq酶用量等因素在差异显示反应过程中的交互作用 ,一次PCR反应即可确定最佳反应组合。将筛选出的条件用于DDRT PCR ,得到差显结果假阳性率低 ,重复性和稳定性好 ,而且简化了反应条件的优选程序 ,这表明正交法是优化差异显示反应条件的理想方法。为了进一步简化整个差异显示反应系统的操作程序 ,降低假阳性率 ,研究采用了非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (polyacrylamidegelelectrophoresis,PAGE)和银染显示差异带的方法 ,并用反向Northern法来验证回收条带 ,从而更加优化了差异显示反应体系

分类号： Q786

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