节瓜ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杜旋

作者： 杜旋;刘娜;鲁博

作者机构：

关键词： 节瓜(Benincasa hispida Cogn. var. chieh-qua How.);ISSR-PCR;正交设计;引物筛选;退火温度

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2019 年 23 期

页码： 7794-7800

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了探索适用于节瓜ISSR-PCR反应的反应体系以及得到适用于该体系的ISSR引物,首先利用正交实验的方法对节瓜ISSR-PCR反应体系的三因素(模板, 2×san Taq PCR mix预混液,引物)的工作浓度进行优化。然后依据Tm值的差异将引物分成了三组,每组分别设定不同的退火温度,以节瓜基因组DNA为模板进行PCR扩增,经2%琼脂糖凝胶电泳和UVP成像,结果表明,第二组引物扩增条带的数目、清晰度明显优于第一组和第三组的引物扩增的条带,第二组45℃退火条件下的扩增情况明显优于在40℃退火条件下的扩增。因此,通过实验与分析,确定了节瓜ISSR-PCR反应体系是DNA模板(50 ng/μL) 2μL、2×san Taq PCR mix预混液10μL、引物(10μmol/L) 1μL,筛选到了18条适合在节瓜的ISSR-PCR反应中应用的引物,其最适合的退火温度是45℃。

分类号： S642.9

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