奶牛瘤胃微生物元基因组文库中二肽基肽酶Ⅳ的筛选与分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵静雯

作者： 赵静雯;王加启;赵圣国;孙鹏;卜登攀;胡小丽;卢玉飞;王丹丹;金迪

作者机构：

关键词： 瘤胃微生物;Fosmid文库;二肽基肽酶Ⅳ;末端序列;酶活性

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2013 年 46 卷 008 期

页码： 1687-1693

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]研究奶牛瘤胃内参与蛋白质降解过程中二肽基肽酶Ⅳ(dipeptidyl peptidasesⅣ,DPP-Ⅳ)的序列特征和酶学性质.[方法]从奶牛瘤胃微生物Fosmid文库中挑选17 664个克隆,利用dpp-Ⅳ简并引物筛选含dpp-Ⅳ的阳性克隆.提取阳性克隆的质粒,用限制性内切酶HindⅢ进行酶切.PCR扩增含dpp-Ⅳ目的片段,并克隆测序.对阳性克隆的Fosmid末端进行测序.提取阳性克隆粗酶液,利用底物Gly-Pro-pNA检测肽酶活性.[结果]筛选后获得10个含有dpp-Ⅳ的阳性克隆(命名为DP1-DP10).Fosmid末端序列经BLASTX比对后发现78%的序列可以与数据库的已知序列相匹配,但相似度变化较大(44%-94%).DPP-Ⅳ序列经BioEdit比对后,发现均含有N端保守区域(DWVYEEE)和C端催化区域(GWSYGG),经BLASTP比对发现阳性克隆的DPP-Ⅳ分别与Cyclobacterium marinum(43%)、Capnocytophaga sp.(63%)、Prevotella ruminicola 23(66%)和Solitalea canadensis(50%)的DPP-Ⅳ相似度高.酶活力检测发现DP7肽酶活力最高,为6.88 U.mg-1.[结论]从瘤胃微生物Fosmid文库中获得了10个含有dpp-Ⅳ的阳性克隆,它们具有不同的dpp-Ⅳ序列特征和肽酶活性.

分类号： S852.6

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