测定化学物对萤光素酶抑制毒性的微板发光法研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 葛会林

作者： 葛会林;刘树深;陈浮;罗金辉;吕岱竹;苏冰霞

作者机构：

关键词： 萤光素酶;微板发光法;最小二乘法;剂量-效应曲线;ATP双相响应

期刊名称： 光谱学与光谱分析

ISSN： 1000-0593

年卷期： 2013 年 33 卷 10 期

页码： 2766-2770

收录情况： EI ; SCI ; 北大核心 ; CSCD

摘要： 基于萤火虫萤光素酶生物发光反应体系,以SpectraMax M5酶标仪为发光强度测试设备,建立了测定化学物对萤光素酶抑制毒性的微板发光测试新方法。系统地研究了萤光素酶浓度、萤光素浓度、ATP浓度、pH、温度、反应时间等实验条件对发光强度的影响。发现ATP对发光呈现双相响应关系,最大发光度出现在ATP浓度为1.1×10-4 mol·L-1。应用该方法成功地测定了NaF,NaCl,KBr和NaBF4对萤光素酶的发光抑制毒性效应,基于非线性最小二乘法拟合化学物对萤光素酶毒性的剂量-效应曲线(DRC),拟合效应与实验结果之间的决定系数(R2)均大于0.99。通过拟合的DRC参数,准确地计算了化学物的半数效应浓度EC50。对比有关文献方法,萤光素酶毒性测试的微板发光法具有更简便快捷,节省试剂药品,便于多次平行测定从而提高准确度等优点。

分类号： X830.2

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