基于密码子优化策略的无乳链球菌表面蛋白LrrG的原核表达、纯化及免疫原性

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈徵婷

作者： 陈徵婷;可小丽;陈刚;黄丽芳;刘志刚;卢迈新

作者机构：

关键词： 无乳链球菌;LrrG蛋白;密码子优化;重组蛋白;原核表达

期刊名称： 大连海洋大学学报

ISSN： 2095-1388

年卷期： 2021 年 006 期

页码： 920-928

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为高效获得可溶性无乳链球菌表面蛋白（LrrG）,通过密码子优化及构建LrrG基因优化后的pCzn1-LrrG重组表达载体,并转染至BL21（Plys）感受态细胞中,高效表达了无乳链球菌Streptococcus agalactiae（GBS）富含亮氨酸重复序列蛋白（LrrG）。根据大肠杆菌密码子偏好性,优化并人工合成LrrG全基因序列,经双酶切后插入至表达载体,将优化后的重组质粒pCzn1-LrrG转染至感受态细胞进行原核表达,经裂解和纯化后获得上清重组蛋白LrrG。结果表明:PCR扩增得到2 286 bp的优化LrrG基因片段,构建的重组质粒pCzn1-LrrG经双酶切获得约4 400 bp和2 286 bp两条片段,与预期值相符;重组载体的测序结果与优化后的基因碱基序列比对结果完全一致,编码的氨基酸序列未发生突变;SDS-PAGE和Western blot鉴定结果显示,获得了相对分子质量约为108 000的LrrG重组蛋白,与理论值相符,且优化后LrrG重组蛋白具有GBS抗原反应原性;通过亲和层析纯化LrrG上清蛋白后,发现优化后可溶性LrrG蛋白表达量较优化前提高了2.2～3.8倍;利用优化后的LrrG蛋白免疫罗非鱼后,发现其对罗非鱼抗GBS感染具有61.54%～69.23%的相对免疫保护率。研究表明,按照大肠杆菌密码子优化GBS表面蛋白LrrG,可有效提高其在大肠杆菌中的表达量,且优化后的LrrG重组蛋白仍然具有较好的免疫原性,本研究结果为基于LrrG基因工程疫苗的制备和应用提供了科学参考。

分类号： S943

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