猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂4848的鉴定及表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 梁盼红

作者： 梁盼红;刘光学;毛立;张少华;王莉杰;王立群;骆学农

作者机构：

关键词： 猪带绦虫;丝氨酸蛋白酶抑制剂;鉴定;表达;候选抗原

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2017 年 12 期

页码： 1486-1491

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为鉴定并表达猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(TsSerpin),提取猪囊尾蚴总RNA,设计引物并通过RT-PCR技术扩增TsSerpin4848基因,将纯化的PCR产物连接到p MD19-T载体后转化大肠杆菌DH5ɑ感受态细胞,筛选阳性克隆并测序,并用生物信息学方法分析其序列和结构特征。构建p ET-30a(+)-4848重组表达载体,经酶切鉴定及测序验证后转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,目的蛋白纯化后进行SDSPAGE和Western-blot分析。结果表明,TsSerpin4848的开放阅读框由1 065个核苷酸组成,编码355个氨基酸残基,其理论分子质量约为39 ku。TsSerpin4848含有serpin家族保守序列DEEGAE和FIVDHPFLFFI,并含有serpin特有的反应中心环结构域,其三级结构中有8个ɑ螺旋和3个β折叠;重组TsSerpin4848蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体形式存在,可被猪囊尾蚴阳性血清识别,表明TsSerpin4848蛋白具有良好的反应原性,有望作为猪囊虫病诊断的候选抗原。

分类号： S852.734

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