鸡传染性法氏囊病病毒Gt株感染性分子克隆的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 祁小乐

作者： 祁小乐;高宏雷;高玉龙;邓小芸;步志高;王晓燕;王笑梅

作者机构：

关键词： 传染性法氏囊病病毒;感染性分子克隆;病毒拯救;分子标签;核酶

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2007 年 40 卷 10 期

页码： 2343-2349

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】建立高效鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)拯救平台,为深入研究该病毒基因组的结构与功能奠定基础。【方法】在IBDVGt株全基因组中引入分子标签(A节段:EcoR V酶切位点;B节段:PstI酶切位点)。在基因组两端分别引入锤头状核酶结构(HamRz)和丁肝病毒核酶结构(HdvRz)。将带有分子标签和核酶结构的IBDV基因组插入载体pCAGGS的β肌动蛋白启动子下游,构建IBDV感染性克隆pCAGGmGtAHRT和pCAGGmGtBHRT,LipofectamineTM2000介导共转染DFI细胞,进行病毒拯救研究。【结果】构建的IBDV感染性克隆可在DFI、Vero/E6、Vero/P12等3种细胞上高效拯救出病毒。RT-PCR、间接免疫荧光、电镜等均检测到了拯救的IBDV,且存在分子标签。拯救毒在CEF上能产生特有的砂砾状CPE,且TCID50与亲本毒差异不显著,具有相似的生物学特征。【结论】构建的RNA聚合酶ⅢBDV拯救系统高效、稳定、简便、经济,且具有良好的细胞普适性。

分类号： S852.65

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