两启动子影响egfp在绿僵菌中的荧光表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘少芳

作者： 王苗苗;涂雄兵;张雄鹏;农向群;曹广春;王广君;张泽华

作者机构：

关键词： egfp;启动子RP27;启动子PgpdA;金龟子绿僵菌;遗传转化

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2015 年 0S1 期

页码： 23-31

收录情况： CSCD

摘要： [目的]通过研究高效组成型三磷酸甘油醛脱氢酶基因启动子PgpdA和稻瘟病菌核糖体蛋白基因启动子RP27对绿色荧光蛋白基因egfp在绿僵菌转化子中表达的影响,为构建具有稳定报告基因的绿僵菌工程菌株提供高表达启动子,并为研究绿僵菌侵染寄主过程及宿存扩散提供依据.[方法]构建含潮霉素B抗性基因hph为标记基因、egfp为报告基因、分别以RP27和PgpdA为启动子的PAN-r-egfp和PAN-p-egfp表达载体.采用CaCl2-PEG介导方法转化金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)菌株Ma9.以激光共聚焦显微镜观察转化子菌丝和分生孢子的荧光强度.[结果]在PAN-r-egfp和PAN-p-egfp转化的hph抗性转化子中,分别有40%和31%实现了egfp在绿僵菌的高强表达.以RP27启动的转化子菌丝和分生孢子均能表达强烈荧光,以PgpdA启动的转化子只有菌丝可观察到较强荧光,但分生孢子无荧光或荧光极弱.[结论]绿色荧光蛋白基因egfp的表达受启动子和绿僵菌生长发育的影响.RP27启动的表达不受金龟子绿僵菌Ma9生长阶段的影响,在菌丝和分生孢子阶段均可启动egfp表达.而PgpdA的启动作用在分生孢子阶段可能受到抑制,不能启动egfp的表达.

分类号： S476.12

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