基于猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF2a基因的RT-RAA-LF检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈素贞

作者： 陈素贞;马佳镁;黄春媛;范悦轩;郑佳馨;刘光亮;曹宗喜

作者机构：

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;ORF2a;侧流层析试纸条;重组酶介导扩增法（RAA）;临床检测

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2023 年 010 期

页码： 1249-1253

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究针对猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF2a基因序列，设计特异性RAA引物和标记探针，通过反转录酶与重组酶扩增结合，旨在建立一种高效检测PRRSV的基于侧流层析试纸条的可视化RT-RAA方法。结果，建立的RT-RAA-LF方法的最佳反应条件是39℃恒温扩增10 min，可在2 min内实现对检测结果的可视化判定；该方法特异性强，仅对PRRSV出现阳性扩增，对本研究中其他病原均无交叉反应；以含PRRSV ORF2a基因全段序列的重组质粒作为模板，RT-RAA-LF的检出限为160 copies/μL。应用建立的RT-RAA-LF方法对临床采集的160份样本进行检测，与PCR方法进行比较，两种方法的符合率为96.8%（65/68），一致性检验为χ~2＜3.84，在95%的置信区间内没有显著性差异，当中3份临床样品在PCR检测中为阴性。综上，基于PRRSV ORF2a建立的RT-RAA-LF方法操作简单，对仪器设备要求不高，能够高效且直观的实现临床检测，满足现场检测的要求，对猪养殖场快速诊断和防控PRRSV具有重要意义。

分类号： S858.28

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