大白菜基因组DNA的提取及AFLP反应体系的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 孟淑春

作者： 孟淑春;张海英;郑晓鹰;刘玉梅;王永健

作者机构：

关键词： 大白菜;DNA提取;AFLP

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2008 年 6 卷 02 期

页码： 370-376

收录情况： CSCD

摘要： 以大白菜嫩叶为材料,利用改进的CTAB法,提取到高质量的大白菜叶片总DNA,通过优化酶切、连接、预扩增、选择性扩增等试验条件,建立了大白菜AFLP银染反应体系,得到了清晰的大白菜AFLP指纹图谱为大白菜品种的分子标记和大白菜品种间亲缘关系等研究奠定了基础。研究结果表明:(1)DNA模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应,改良的CTAB提取法可用于大白菜AFLP分析,形成清晰的AFLP指纹。(2)大白菜基因组DNA最佳酶切反应体系为:模板DNA总量150ng,反应体积为12.5μL,EcoRⅠ1.25U,MseⅠ1.25U,5×ReactionBuffer,最佳酶切时间为:37℃酶切4h。连接反应于20℃连接2.5h即达最佳效果。(3)6对引物组合(E-AAC/M-CAG、E-AAG/M-CAC、E-ACA/M-CTG、E-ACT/M-CAC、E-ACT/M-CTT、E-ACT/M-CTC)均获得稳定、清晰的扩增图谱,可进行中国大白菜的遗传变异分析。

分类号： S634.1

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