FADS1基因对猪不饱和脂肪酸含量的影响研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张天天

作者： 张天天;华再东;任红艳;顾浩;周彬;毕延震

作者机构：

关键词： FASD1基因;过表达;脂肪酸;ω-3;ω-6

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2023 年 002 期

页码： 451-459

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】研究脂肪酸去饱和酶1（fatty acid desaturases 1,FADS1）基因对不饱和脂肪酸代谢的调控作用，为揭示其分子机制提供参考。【方法】利用PCR扩增猪FADS1基因的CDS区，将目的基因与pcDNA3.1（-）骨架载体连接获得重组表达载体pcDNA3.1-FLAG-FADS1,将重组表达载体瞬时转染宁乡猪肾成纤维细胞，转染后24、48 h分别收集细胞，利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测FADS1基因的表达情况，经过遗传霉素（geneticin, G418）筛选之后获得稳定表达FADS1基因的细胞系，命名为1-4#。利用甘油三酯检测试剂盒检测野生型和1-4#细胞甘油三酯含量变化；利用气相色谱质谱法（gas chromatography-mass spectrometer, GC-MS）检测野生型和1-4#细胞不饱和脂肪酸含量变化情况。【结果】成功获得过表达载体pcDNA3.1-FLAG-FADS1,在转录水平和蛋白水平检测均有过表达效果。通过G418筛选出1株稳定过表达FADS1基因的单克隆细胞。甘油三酯含量测定结果显示，与野生型宁乡猪肾成纤维细胞相比，过表达FADS1的宁乡猪肾成纤维细胞中甘油三酯的含量显著降低（P＜0.05）。不饱和脂肪酸检测结果显示，过表达FADS1后，总脂肪酸的含量极显著升高（P＜0.01）,提高1.8倍，多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acid, PUFA）中ω-3 PUFA、ω-6 PUFA含量均极显著升高（P＜0.01）,二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid, EPA）、二十二碳五烯酸（docosapentaenoic acid, DPA）、二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid, DHA）的相对含量极显著提高（P＜0.01）,ω-3/ω-6值显著提高（P＜0.05）。【结论】成功构建超表达载体pcDNA3.1-FLAG-FADS1,并在宁乡猪肾成纤维细胞中成功筛选到了1株稳定超表达FADS1基因的单克隆细胞1-4#,经检测，FADS1基因超表达能显著降低细胞中甘油三酯含量、提高ω-3 PUFA含量及占比，提高ω-3/ω-6值。

分类号： S828

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