小峰熊蜂可溶型海藻糖酶基因的克隆及表达分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 秦加敏

作者： 秦加敏;罗术东;廖秀丽;黄家兴;和绍禹;吴杰

作者机构：

关键词： 小峰熊蜂;可溶型海藻糖酶基因;克隆;序列分析;基因表达

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2015 年 48 卷 02 期

页码： 370-380

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】克隆小峰熊蜂(Bombus hypocrita)可溶型海藻糖酶基因(soluble trehalase,Tre-1)全长c DNA序列,预测该基因及其编码蛋白的理化性质,明确该基因在小峰熊蜂不同组织及不同发育时期的表达特性,为研究该基因在小峰熊蜂生长发育中的生物学功能奠定基础。【方法】根据地熊蜂(B.terrestris)和B.impatiens可溶型海藻糖酶基因Tre-1编码蛋白的保守区序列,利用Primer Premier 5.0设计简并引物扩增得到小峰熊蜂保守区片段;随后根据该片段设计基因特异性引物,用RACE方法获得5'端和3'端片段。在此基础上,根据RACE扩增所得片段和保守序列,预测开放阅读框(ORF)序列,分别在起始密码子近5'端和终止密码子的近3'端设计ORF区特异性引物扩增得到ORF,最后采用Bio Edit软件比对、拼接获得小峰熊蜂Tre-1 c DNA全长序列。运用Ex PASy、Signal P 4.1、Net OGlyc 1.0 sever、Clustal W和MEGA 5.0等软件对该基因进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR技术,采用2-ΔΔCt方法检测不同组织及不同发育时期可溶型海藻糖酶基因的相对表达量。【结果】克隆所得基因c DNA全长为3 129 bp,命名为BhTre-1(Gen Bank登录号:KJ025078),其中包含5'端441 bp非编码区和3'端945 bp非编码区,ORF为1 743 bp,共编码580个氨基酸。其编码的蛋白预测分子质量为67.16 k D,等电点为5.95;有1个信号肽结构(1—21位),1个甘氨酸富集区(GGGGEY),2个特色"标签序列"(PGGRFKEFYYWDSY和QWDFPNAWPP),6个Asn-Xaa-Ser/Thr(N-X-S/T)序列,无跨膜区。序列分析发现BhTre-1氨基酸序列与地熊蜂BtTre-1和B.impatiens BiTre-1的一致性很高,分别为99%和98%,与西方蜜蜂(Apis mellifera)和云南小蜜蜂(A.florea)的Tre-1一致性也达到78%;系统发育分析也表明BhTre-1与BtTre-1、BiTre-1的亲缘关系最近,与AmTre-1、AfTre-1之间的亲缘关系次之。基因定量分析结果显示BhTre-1在成虫被检测的各组织中均有表达,在中肠的表达量最高,其次是马氏管,其他各组织表达量较低。成年工蜂的BhTre-1表达量高于幼虫和蛹,工蜂出房后随着龄期的增加表达量呈现先升高后降低的规律,在第15天表达量最高。【结论】克隆得到了BhTre-1全长c DNA序列,其分子生物学特性与其他昆虫Tre-1相似,该基因在小峰熊蜂中肠表达量最高,此外,幼虫和蛹的表达量低于成年工蜂,工蜂出房后表达量呈现先升高后降低的趋势,为进一步研究该基因在小峰熊蜂体内的生物学功能奠定了基础。

分类号： S891

  • 相关文献

[1]小峰熊蜂蜂毒磷脂酶A2基因的克隆及表达分析. 高丽娇,黄家兴,吴杰. 2013

[2]斑节对虾细胞周期蛋白E基因的克隆与表达分析. 赵超,傅明骏,江世贵,周发林,杨其彬,朱彩艳,邱丽华. 2014

[3]福建白兔钙蛋白酶抑制蛋白基因的克隆及其表达差异研究. 陈冬金,桑雷,孙世坤,陈敏卿,陈岩锋,王锦祥,谢喜平. 2022

[4]锦鲤Hepcidin基因的克隆及其组织特异性表达分析（英文）. 马志宏,姜娜,邢薇,李铁梁,袁丁,李文通,李炯棠,罗琳. 2017

[5]小峰熊蜂LIM基因片段的克隆及其结构分析. 李继莲,吴杰,安建东. 2008

[6]向日葵E3泛素连接酶基因克隆及表达分析. 张艳芳,孙瑞芬,郭树春,于海峰,石慧芹. 2016

[7]马铃薯StNAC72基因克隆及表达分析. 巩檑,甘晓燕,张丽,陈虞超,聂峰杰. 2016

[8]泰国斗鱼抗缪勒氏管激素(AMH)基因cDNA克隆及表达. 陈华谱,洪广,刘燕华,贺超,王晓玲,吴静娴,朱春华,李广丽. 2017

[9]向日葵V-ATPasea3亚基基因的克隆及表达分析. 张艳芳,孙瑞芬,郭树春,侯建华. 2017

[10]黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco AMH基因的克隆鉴定及表达. 王乐,程磊,王秋实. 2019

[11]杜梨响应盐胁迫CIPK01的克隆及表达分析. 王影,李慧,蔺经,杨青松,常有宏. 2019

[12]施氏鲟促性腺激素α亚基的克隆、序列分析及表达调控. 高雪,吕伟华,马波,王念民,韩世成,张颖. 2020

[13]鲤食物转化率相关候选基因ffar3序列与表达分析. 张晓峰,栾培贤,户国. 2020

[14]番木瓜凝乳蛋白酶基因启动子的克隆及功能研究. 杨英军,周鹏,李艳梅,沈文涛. 2008

[15]花生热激蛋白AhHSP70与热激因子AhHSF基因的克隆及表达分析. 李翠,侯蕾,任丽,张烨,郑奕雄,王兴军. 2015

[16]大豆Usp1基因的克隆和表达分析. 黄姗,王伟旗,侯文胜. 2012

[17]粗胫翠尺蛾视蛋白基因的克隆及灯光对其表达量的影响. 姚琼,全林发,徐淑,董易之,李文景,池艳艳,陈炳旭. 2022

[18]桑树光合系统Ⅰ psaE基因的克隆及表达分析. 林强,扈东青,方荣俊,赵卫国,朱方容,张英华,刘赵越,潘宝华,刘利,张林,潘刚. 2010

[19]黄瓜硝酸还原酶cDNA片段的克隆及其在缺氮胁迫下的表达. 毛伟华,龚亚明,夏晓剑,周艳虹,喻景权. 2007

[20]连城白鸭MITF基因的cDNA克隆、组织表达与分析. 辛清武,刘艺展,朱志明,李丽,章琳俐,缪中纬,郑嫩珠. 2018

作者其他论文 更多>>

微信小程序