传染性法氏囊病毒VP_2在酵母细胞内的高效表达及其免疫原性研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王笑梅

作者： 王笑梅;王牟平;高宏雷;付朝阳;曾祥伟;张守发

作者机构：

关键词： 传染性法氏囊病病毒;VP2;酵母表达;免疫原性

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2003 年 36 卷 04 期

页码： 443-447

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 应用Pichia酵母表达系统高效表达了传染性法氏囊病毒 (IBDV)VP2 基因片段。首先用OLIGO设计 1对引物P5、P6 ,以插入IBDVVP2 基因的 pUC19为模板 ,扩增出带有终止密码子的 1.5kb片段 ,将此片段正向亚克隆到 pPICZA表达载体上 ,将构建好的载体pPICVP2 用SacI内切酶线性化后 ,转染酵母PichiapastorisGS115细胞 ,经PCR鉴定 ,筛选出 5 0多个重组子。分别用甲醇诱导后 ,经SDS PAGE凝胶电泳、琼脂扩散试验、Dot ELISA检测 ,得到 9个不同程度表达 4 1kuVP2 活性蛋白的阳性重组子。经凝胶薄层扫描仪分析 ,表达蛋白占酵母细胞总蛋白的最高比率为 16 % ,表达量为 0 .6 2 0 8g·L-1。表达产物免疫SPF鸡可诱导产生特异性抗体 ,并能保护鸡抵抗超强毒致死性攻击 ,具有良好的免疫原性。

分类号： S858.31

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