辽东地区胡桃楸天然林ISSR分子标记体系的建立和优化
文献类型: 中文期刊
第一作者: 王斯彤
作者: 王斯彤
作者机构:
关键词: 胡桃楸;ISSR分子标记;体系优化
期刊名称: 分子植物育种
ISSN: 1672-416X
年卷期: 2021 年 007 期
页码: 2286-2292
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 为建立胡桃楸天然林ISSR-PCR反应体系,本实验从DNA的提取到扩增进行了研究。通过对比CTAB和试剂盒两种方法,发现胡桃楸最佳DNA提取方法为试剂盒法。利用正交试验设计法确定了胡桃楸ISSR-PCR反应最佳体系,并对影响胡桃楸PCR反应的Taq酶浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度等因素进行了优化。最终获得胡桃揪ISSR-PCR反应的最优扩增程序为:95℃预变性320min,95℃变性3020s,48.3℃复性3020s,72℃延伸120min,28次循环,最后72℃终延伸520min。优化胡桃楸ISSR-PCR的最佳反应体系为:Taq20DNA聚合酶浓度为0.7520U/20μL、Mg2+浓度为1.7520mmol/L、dNTP浓度为0.2020mmol/L、引物浓度为0.35μmol/L、DNA模板浓度为15020ng/20μL。该研究为以后利用ISSR分子标记技术研究胡桃楸的亲缘关系和遗传多样性提供高效的技术手段。
分类号: S792.132
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