O型口蹄疫病毒血清抗体竞争ELISA检测方法的建立及验证

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨志元

作者： 杨志元;白满元;张韵;闻晓波;孙世琪;郭慧琛;冉旭华

作者机构：

关键词： O型口蹄疫病毒;病毒样颗粒;血清抗体;竞争ELISA法

期刊名称： 中国生物制品学杂志

ISSN： 1004-5503

年卷期： 2020 年 04 期

页码： 438-444

收录情况： CSCD

摘要： 目的建立O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)血清抗体的竞争ELISA检测方法,并进行验证。方法采用O型FMDV病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)作为包被抗原,建立用于检测FMDV血清抗体的竞争ELISA方法。对方法的抗原包被浓度(0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5、0. 6、0. 7、0. 8、0. 9、1. 0μg/mL)、抗原包被温度及时间(4℃过夜、37℃1 h、37℃1.5 h、37℃2 h、37℃2. 5 h、37℃3 h)、血清稀释度(1∶2、1∶4、1∶8、1∶16稀释)、HRP-IgG稀释度(1∶10 000～1∶20 000稀释)、封闭液种类(不封闭、1%BSA封闭、2%BSA封闭、5%脱脂乳封闭)、封闭液作用时间(30、60、90、120 min)、血清与HRP-IgG作用时间(30、60、90、120、150 min)、底物TMB作用时间(10、15、20、25、30 min)进行优化。同时验证方法的交叉反应、特异性及敏感性、精密性。采用建立的方法及O型FMDV抗体液相阻断ELISA检测试剂盒分别检测未知血清背景的138份猪和牛血清,计算两者的符合率。结果方法最适检测条件为:抗原包被浓度0. 5μg/mL,抗原包被温度及时间为4℃过夜,血清稀释度为1∶4;HRP-IgG稀释度为1∶18 000;封闭液为1%BSA,封闭液作用时间为30 min;HRP-IgG与血清作用时间为30 min;底物作用时间为10 min。21份不同猪病的阳性血清中,除3份O型FMD阳性血清为阳性外,其他血清样品为阴性,该方法无交叉反应;敏感性为90. 4%,特异性为95. 7%;批内和批间精密性试验变异系数(CV)均<10%。该方法与口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒检测结果的符合率为97%。结论建立的方法具有良好的特异性及精密性,且操作简便,可用于O型FMDV血清抗体的检测。

分类号： S852.65

  • 相关文献

[1]嵌合O型口蹄疫病毒多表位基因猪细小病毒VLPs载体疫苗的构建. 潘群兴,诸玉梅,王永山,何孔旺,王晓丽,欧阳伟,毕振威,夏兴霞. 2013

[2]重组表达口蹄疫病毒T细胞表位猪细小病毒病毒样颗粒的制备. 潘群兴,王永山,何孔旺,欧阳伟,王晓丽,诸玉梅,夏兴霞. 2010

[3]A型口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备鉴定. 兰宗宝,何奇松,蒋家霞,冯淑萍,黄胜斌,韦达有,易春华,许瑞胜. 2016

[4]A型口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定. 兰宗宝,何奇松,蒋家霞,冯淑萍,黄胜斌,韦达有,易春华,许瑞胜,梁晟,熊毅. 2016

[5]抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及其生物*学特性鉴定. 赵磊,魏建忠,周国辉,于永忠,李万,于力. 2008

[6]表达O型口蹄疫病毒保护性抗原表位重组PRRSV的构建及其鉴定. 童武,陈焕春,童光志,徐彦召,周艳君,姜一峰,张善瑞,王亚欣,朱建平,虞凌雪,孙晶. 2012

[7]O型口蹄疫病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达. 梁特,杨德成,刘蒙蒙,周国辉,孙超,魏萍,于力. 2013

[8]检测O型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析法的建立. 祁光宇,智晓莹,任维维,黄银军,牟克斌,刘学荣,王宇,蒋韬. 2010

[9]O型口蹄疫病毒VP1基因区序列系统发育树分型. 相磊,章振华,胡国良,陈小玲,梁之昶,徐福洲,石岗. 2007

[10]含免疫增强剂CVC1302口蹄疫灭活疫苗缩短免疫应答窗口期机制的研究. 杜露平,章晨昕,侯立婷,于晓明,郑其升,陈瑾. 2021

[11]O型口蹄疫病毒蛋白酶3C基因在哺乳细胞中的表达. 马琪,陈豪泰,薛慧文. 2014

[12]O型口蹄疫病毒间接免疫荧光检测方法的建立. 蔡扩军,乔军,孟庆玲,陈创夫,马铈委,黄炯,魏婕. 2012

[13]O型口蹄疫病毒免疫层析试纸条检测方法的建立. 蒋韬,梁仲,陈涓,何继军,吕律,马维民,田宏,刘在新,刘湘涛. 2008

[14]抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体相对亲和力的测定. 宋帅,林彤,邵军军,常惠芸. 2009

[15]三株O型口蹄疫病毒单克隆抗体的抗原识别位点分析. 宋帅,林彤,邵军军,丛国正,独军政,常惠芸,胡永浩. 2008

[16]O型口蹄疫病毒P1-2A3C基因在家蚕杆状病毒表达系统中的表达. 张韵,易咏竹,李志勇,张志芳,柳纪省. 2008

[17]O型口蹄疫病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及其抗原性鉴定. 解银丽,马琪,李志勇. 2015

[18]用protein G纯化口蹄疫病毒单克隆抗体的特性分析. 宋帅,林彤,邵军军,丛国正,独军政,高闪电,常惠芸. 2009

[19]抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体轻链可变区的克隆及序列分析. 宋帅,林彤,邵军军,丛国正,独军政,高闪电,常惠芸. 2009

[20]亲和层析和反相层析纯化O型口蹄疫病毒单抗的比较. 宋帅,林彤,邵军军,常惠芸,胡永浩. 2009

作者其他论文 更多>>

微信小程序