基于5'UTR基因的牛肠道病毒TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陆泳锟

作者： 陆泳锟;张德雄;王晓虎;陈晶;黄元;马惠海;李学泓;陈翔宇;黄淑坚;王刚

作者机构：

关键词： 牛肠道病毒;5’UTR基因;TaqMan探针法;实时荧光定量PCR

期刊名称： 病毒学报

ISSN： 1000-8721

年卷期： 2025 年 41 卷 005 期

页码： 1488-1498

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立一种可快速、特异、高效检测牛肠道病毒（Bovine enterovirus,BEV）的实时荧光定量PCR检测方法，本研究根据GenBank数据库BEV流行毒株5’UTR保守基因序列设计合成特异性引物及探针，并以BEV阳性核酸5’UTR基因序列构建的标准质粒为模板，采用矩阵法对引物和探针浓度、退火温度进行优化及绘制标准曲线，同时进行灵敏性、重复性及特异性验证和临床样本检测。结果表明，该检测方法在重组质粒标准品模板浓度为4.05×10～2～4.05×10～9拷贝/μL范围内呈现良好的线性关系，相关系数R2为0.9975，线性方程斜率为3.4539，扩增效率为94.7%，最低检测限度为4.05×10～2拷贝/μL，比常规RT-PCR检测方法灵敏度高100倍；组内和组间的变异系数均小于0.8%；与牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea mucosal disease virus,BVDV）、轮状病毒（Rotavirus,RV）、牛传染性鼻气管炎病毒（Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV）和牛流行热病毒（Bovine ephemeral fever virus,BEFV）均无交叉反应。应用该检测方法对牛场采集的36份腹泻牛的粪便样品和24份肛拭子样品进行检测，检测阳性率分别为94.44%（34/36）和91.67%（22/24）。经试验验证表明，该检测方法具有较好的灵敏性、重复性及特异性，可应用于牛常规临床样本中BEV的鉴别诊断，为BEV的防控提供了有力的技术支持。

分类号： S852.653

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