小反刍兽疫病毒P蛋白的表达、纯化及抗体的制备及初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 翟军军

作者： 翟军军;窦永喜;张海瑞;毛立;蒙学莲;王秋霞;骆学农;才学鹏

作者机构：

关键词： PPRV;P蛋白;表达;纯化;抗体制备;应用

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2010 年 41 卷 08 期

页码： 995-1000

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本文旨在对小反刍兽疫病毒P蛋白进行原核表达,并利用表达的蛋白制备抗血清,然后用于间接免疫荧光检测。将构建好的pET-30a(+)-P重组表达质粒转化大肠杆菌构建P蛋白的原核表达体系。重组菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE电泳检测融合蛋白得到了表达。通过对表达条件的优化,确定了P蛋白在28℃、IPTG诱导浓度为0.2 mmol.μL-1的条件下诱导6 h,可溶性P蛋白表达量最高。利用镍柱亲和层析法纯化可溶性的P蛋白,然后以纯化的蛋白为抗原免疫小鼠,制备了多克隆抗体,其滴度最高可达1∶25 600,而且特异性好,表明获得了P蛋白的多克隆抗体。同时利用所制备的抗体对pcDNA3.1/P真核表达进行了间接免疫荧光检测。P蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达,并制备了特异性好、滴度高的抗血清,为研究P蛋白功能奠定了基础。

分类号： S852.659.5

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