水貂IFN-α、IFN-β及IFN-γmRNA荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王洋

作者： 王洋;胡博;张海玲;鲁荣光;吕爽;刘昊;孙彦刚;马凡舒;赵建军;张蕾;薛向红;史宁;白雪;徐淑娟;范思宁;凌明玉;李欣彤;闫喜军

作者机构：

关键词： SYBR GreenⅠ;实时荧光定量PCR;水貂;α干扰素;β干扰素;γ干扰素

期刊名称： 动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2015 年 11 期

页码： 1-6

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为采用SYBR GreenⅠ染料建立检测水貂IFN-α、IFN-β和IFN-γmRNA荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank中登录的MiIFN-α和MiIFN-β、MiIFN-γ和3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因序列,分别设计合成特异性引物,通过RT-PCR扩增MiIFN-α、MiIFN-β、MiIFN-γ和MiGAPDH的基因片段,构建到pMD18-T载体中制备质粒标准品,建立了相应基因mRNA的荧光定量RT-PCR检测方法并建立标准曲线。结果表明,MiGAPDH、MiIFN-α和MiIFN-β和MiIFN-γ基因的Ct值与标准品稀释度在10拷贝质粒/μL~107拷贝质粒/μL内均呈良好的线性关系,相关系数(R2)均为1.00,熔解曲线均呈单一熔解峰,检测下限为10拷贝质粒/μL,重复性试验表明组内、组间变异系数均小于4.5%。临床样品检测结果表明水貂感染肠炎病毒后,MiIFN-α、MiIFN-β和MiIFNγ相对表达水平均在6d达到最高峰值,MiIFN-α相对表达量要比MiIFN-β和MiIFN-γ相对表达量高两个数量级,并且在感染期(4d~6d)MiIFN-α相对表达量明显提高。本研究为水貂IFN mRNA的定量分析提供了有效工具。

分类号： S865.22

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