以番鸭呼肠孤病毒σC表达蛋白为抗原的ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 耿宏伟

作者： 耿宏伟;郭东春;张云;胡奇林;刘明;张序;王立群

作者机构： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生物技术国家重点实验室;福建省农业科学院畜牧兽医研究所;哈尔滨市兽医卫生防疫站;东北农业大学生命科学院

关键词： 番鸭呼肠孤病毒;σC编码基因;原核表达;酶联免疫吸附试验

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2006 年 36 卷 03 期

页码： 171-176

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 将鸭呼肠孤病毒小外壳σC蛋白编码基因克隆于原核表达载体pET32a上,经EcoRⅠ和SacⅠ双酶切鉴定及序列分析,获得了重组质粒pET32a-σC,转化DH5α大肠埃希氏菌感受态细胞后,经SDS-PAGE和Western-blotting分析,融合蛋白能够与番鸭呼肠孤病毒感染康复鸭血清发生特异反应;以0.15 mmol/L IPTG诱导,5 h后融合蛋白σC表达量可达高峰,分子质量为50ku;融合蛋白纯化后被用作包被抗原,建立了检测鸭血清中呼肠孤病毒抗体的间接ELISA,经对检测条件优化,最佳包被浓度为5μg/mL,标准阳性血清的最适稀释倍数为1∶40。用该方法对50份鸭血清样品进行了检测,与琼脂扩散抗体检测法相比,ELISA具有良好的特异性和敏感性。

分类号： S858.32

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