高粱SbGABA-Ts基因的克隆、原核表达及纯化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨泽伟

作者： 杨泽伟;王龙海;朱莉;汪海;黄大昉;郎志宏

作者机构：

关键词： 高粱GABA-T;原核表达;纯化;信号肽

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2015 年 31 卷 05 期

页码： 93-99

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 植物中GABA(γ-氨基丁酸)代谢与植物生长发育、信号传递及逆境响应等过程密切相关,而参与GABA代谢的关键酶GABA-T(γ-氨基丁酸转氨酶)在重要农艺作物中的研究相对滞后。利用同源性分析在高粱基因组数据库中获得两个γ-氨基丁酸转氨酶(SbGABA-T)基因,RT-PCR方法进行基因克隆,并连入原核表达载体pET28a(+),转化E.coli BL21(DE3)进行基因异源表达分析。结果表明,包含SbGABA-T编码区全长的融合蛋白主要在包涵体中表达,而去除了SbGABA-T N端信号肽的融合蛋白以部分可溶的形式存在。进一步优化表达条件,IPTG浓度为1 mmol/L时,16℃低温诱导18h,即可获得大量可溶性融合蛋白。用带His标签的镍柱对融合蛋白进行了纯化。

分类号： S514

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