玉米叶面微生物DNA提取方法及PCR引物的筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵辉

作者： 赵辉;李世国;孙红炜;李凡;田晓燕;颜世磊;路兴波

作者机构：

关键词： 玉米;叶面微生物;DNA提取;PCR;16SrDNA;18SrDNA

期刊名称： 山东农业科学

ISSN： 1001-4942

年卷期： 2012 年 44 卷 02 期

页码： 15-20

摘要： 传统的微生物培养方法在反映叶面微生态信息上具有局限性,因此逐渐被分子生态学所代替,而获得高质量、大片段、无偏好的总DNA是研究叶面环境微生物的基础。本文采用改进的Sambrook法、CTAB法、改良的化学法以及试剂盒法对玉米生长初期、中期、末期的叶面微生物总DNA进行提取,并对4种方法提取的DNA片段的大小和产量进行综合评价。将得到的DNA用引物357/518以及984/1387对细菌16S rDNA进行扩增;用5种常见引物NS1/fung、ITS1-F/ITS2、NS1/AM1、EF4/fung5、SSU-0817/SSU-1196对真菌18SrDNA进行扩增。结果表明:4种方法提取的DNA片段均适用于PCR,但DNA的得率和纯度有一定差别,其中以试剂盒提取效果最好。PCR结果显示,除化学法外,其他3种方法提取的DNA均能够获得目的条带;并通过比较得出引物984/1387对16S rDNA以及ITS1-F/ITS2对18S rDNA扩增效果较好且扩增量最大。

分类号： S513

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