牛分枝杆菌MarP蛋白的表达纯化及其单克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 林伟东

作者： 林伟东;隋修锟;王召阳;贾红;房立春;王海春;朱良全;鑫婷

作者机构：

关键词： 牛分枝杆菌;抗酸;抗酸蛋白酶(MarP);单克隆抗体(MAb);丝氨酸蛋白酶

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2019 年 6 期

页码： 1774-1782

摘要： 为制备能够特异性识别牛分枝杆菌(M.bovis)抗酸蛋白酶(MarP)的特异性单克隆抗体(MAb),本研究利用大肠杆菌表达系统表达了MarP蛋白的胞浆区,并以β-casein为底物、DTT为抑制剂检测MarP的丝氨酸蛋白酶活性.以具有活性的MarP蛋白免疫小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,并加入饲养层细胞轻轻摇匀分装于96孔培养板,置于37℃、5%CO2培养箱内培养10 d,通过IFA和间接ELISA筛选阳性细胞株进行亚克隆,制备能分泌针对MarP MAb的杂交瘤细胞株,并通过Western blotting和ELISA检测MAb与重组表达和天然的MarP蛋白的反应性.结果显示,重组表达的MarP具有良好的丝氨酸蛋白酶活性,能够在12 h内将30μg的β-casein酶解完全,DTT能够抑制MarP的酶活性.具有活性的MarP蛋白免疫小鼠后,获得5株针对MarP的MAb,均能够特异性识别重组和牛分枝杆菌天然表达的MarP蛋白的线性表位,而不与大肠杆菌(E.coli)和耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)的蛋白反应.本研究成功制备了MarP蛋白及MAb,为进一步研究MarP的作用底物及其在牛分枝杆菌抗酸胁迫中作用机制提供了必备材料.

分类号： S852.618

  • 相关文献

[1]巴泰病毒单克隆抗体的制备及鉴定. 朱翔宇,史宁,李丽霞,蔡熙姮,刘昊. 2020

[2]小鼠杂交瘤细胞系的建立及抗兔IgG单克隆抗体的应用. 王远程,郭军,蔡少华. 1991

[3]传染性法氏囊病病毒VP2单克隆抗体夹心ELISA检测试剂盒的研制. 刘静静,王永山,欧阳伟,夏兴霞,潘群兴,王晓丽,毕振威,诸玉梅,朱瑞良. 2014

[4]牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及其应用. 赵洪哲,范峻豪,李新培,王昊,关平原,温永俊. 2019

[5]中国小麦花叶病毒(CWMV)单克隆抗体制备及其检测应用. 刘欢,李娜,周雪平,任春梅,程兆榜,吴建祥. 2015

[6]动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ.分泌抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立. 夏兴霞,刘洁,王永山,诸玉梅,欧阳伟,何孔旺,张雪寒. 2009

[7]苜蓿丝氨酸蛋白水解酶及青贮时对蛋白降解作用的研究. 程巍,郭旭生. 2011

[8]少孢节丛孢菌Aoz1基因的生物信息学分析及原核表达条件的优化. 尹相吉,王新芳,聂福贵,郭少平,钱英红,陈湘江,乔一丹,李泽浩,符江涛,杨晓野,王瑞. 2019

[9]茶尺蠖丝氨酸蛋白酶基因EoSP1的克隆、时空表达及对饥饿的表达响应. 张新,陈成聪,杜琴,李喜旺,孙晓玲. 2019

[10]绿盲蝽丝氨酸蛋白酶基因AlSP3的鉴定及表达谱分析. 柏立新,张永军,肖留斌,谭永安,盛洋. 2012

[11]镰形扇头蜱serpin分子的克隆表达和功能鉴定. 俞英昉,狄青,周勇志,曹杰,张厚双,周金林. 2011

[12]甘露糖结合凝集素相关的丝氨酸蛋白酶2研究进展. 王新菊,鞠志花,王长法,李国荣. 2012

[13]草菇丝氨酸蛋白酶基因在贮藏期表达变化的研究. 逯连静,陈明杰,邢增涛,陈国荣. 2015

[14]不同温度影响下绿盲蝽丝氨酸蛋白酶基因AlSP3的表达谱分析. 盛洋,孙洋,柏立新,肖留斌,谭永安. 2013

[15]食线虫真菌侵染性胞外酶研究进展. 赵海龙,孟庆玲,乔军,贡莎莎,才学鹏. 2017

[16]柑橘类枯草杆菌蛋白酶基因CcSubtilisin的克隆及遗传转化. 李菊,张永艳,胡敏伦,闫化学,姜波,谢丹,袁超力,钟广炎. 2015

[17]少孢节丛孢菌新疆分离株丝氨酸蛋白酶全长基因的克隆及生物信息学分析. 王俊伟,孟庆玲,乔军,王为升,罗建勋,才学鹏,赵春光. 2011

[18]弗氏链霉菌丝氨酸蛋白酶基因的克隆及表达. 李江,石鹏君,张王照,韩晓宇,徐玲玲,张会图,姚斌,范云六. 2005

[19]利用酵母双杂交系统筛选BmNPV PE38的互作蛋白. 管蕊,唐旭东,徐莉,朱峰,沈中元. 2012

[20]少孢节丛孢菌丝氨酸蛋白酶家族基因的克隆及生物信息学分析. 赵海龙,孟庆玲,乔军,陈双庆,谢堃,罗建勋,才学鹏. 2015

作者其他论文 更多>>

微信小程序