口蹄疫病毒VP2蛋白特异性单克隆工程抗体的表达与活性鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王省

作者： 王省;李坤;卢曾军;刘在新;李冬;包慧芳;李平花;孙普;白兴文;陈应理;付元芳;张婧;马雪青;曹轶梅

作者机构：

关键词： 口蹄疫病毒;单个B细胞抗体技术;单克隆工程抗体;衣壳蛋白VP2

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2019 年 8 期

页码： 939-946

摘要： 为了在牛上应用单个B细胞抗体技术制备口蹄疫病毒(FMDV)特异性单克隆抗体,本研究利用生物素标记O型FMDV 146S抗原,从免疫牛外周血单个核细胞(PBMCs)中分选单个抗原特异性B细胞,通过单个B细胞抗体基因测定,获得Ig G抗体重链与轻链可变区编码序列,将可变区基因插入含有牛Ig G抗体恒定区的pcDNA3.4载体中,构建完整Ig G抗体的表达质粒.将表达质粒转染中国仓鼠卵巢悬浮细胞(CHO-S)进行抗体表达与纯化.经病毒中和试验(VNT)、间接免疫荧光试验(IFA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、Western-blot验证抗体的生物活性.结果显示,获得了4株FMDV特异性单克隆工程抗体,其中2株(A35、B57)可以中和O型FMDV;2株(A7、E32)IFA检测为阳性,其中E32可特异性结合O型和A型FMDV两种抗原,但没有病毒中和活性;ELISA结果显示,E32具有较好的亲合力;Western-blot结果显示,E32可特异性结合衣壳蛋白VP2,说明在衣壳蛋白VP2存在型间保守的抗原位点,为通用型FMDV抗原检测方法的研究提供了材料.

分类号： S852.4

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