猪Ⅱ型圆环病毒全基因组序列分析及其ORF1和ORF2基因的克隆与表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 韩凌霞

作者： 韩凌霞;陈艳;崔尚金;王云峰;仇华吉;童光志

作者机构：

关键词： PCV-2;原核表达;诊断抗原

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2004 年 26 卷 001 期

页码： 10-13

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 猪Ⅱ型圆环病毒(PCV-2)的2个主要开放阅读框ORF1和ORF2分别编码病毒的复制酶REP和结构蛋白CAP.本试验将分离株L株病毒感染PK15细胞系,提取总DNA并以其为模板,通过PCR分别扩增了全病毒基因组、完整的REP和CAP基因,并克隆到PMD18T载体中,进行了序列测定.将REP和CAP基因亚克隆到大肠杆菌表达载体PPROEXTMHT中,以融合蛋白的形式表达了这两种蛋白.根据文献报道,致病性的PCV-2与无致病性的PCV1的型特异性抗原决定簇主要位于CAP基因的羧基端部分,本实验利用原核表达载体PGEX-6P-1融合表达了CAP基因羧基端423BP的片段.通过薄层扫描各重组菌诱导表达产物的SDS-PAGE结果,重组质粒PPRO-CAP和PPRO-REP以及PGEX-△CAP的外源基因表达量分别占总菌体总蛋白的15.1%、30.4%和19.6%.将表达的三种蛋白作为抗原,通过酶联免疫吸附试验分别与PCV-2阳性猪血清和SPF猪血清进行了反应,PGEX-△CAP表达的蛋白(CAP蛋白的羧基端部分)抗原反应性最强,这表明截短的CAP蛋白羧基端部分将是一个良好的诊断PCV-2感染用候选抗原.

分类号： S852.65+9.2%Q784

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