猪链球菌2型主要毒力因子三重荧光定量PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王蓉蓉

作者： 王蓉蓉;孙卫东;蒋蔚;刘迎春;陈永军;薛俊欣;张梦;王权

作者机构：

关键词： 猪链球菌2型;三重荧光定量PCR;毒力因子

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2014 年 06 期

页码： 25-31

摘要： 根据GenBank中猪链球菌2型三种毒力因子CP2SJ、MRP、EF基因序列,利用Primer Express 3.0软件分别设计3对特异性的引物及相应的Taqman探针。CP2SJ、MRP、EF探针5′端分别标记FAM、HEX、CY5荧光发射基团,3′端标记BHQ1淬灭荧光基团。通过优化反应体系和程序,建立了一种基于Taqman探针法的三重荧光定量PCR,可同时检测上述三种毒力基因。该方法灵敏度高,CP2SJ、MRP、EF的最低检测限分别为90、40、60拷贝数/μL的质粒;特异性强,与其他病原菌无交叉反应;重复性好,变异系数均小于3%。整个检测扩增在60 min内完成。以上结果表明本试验所建立的三重荧光定量PCR方法的敏感性、重复性及特异性均较好,可用于同时快速检测猪链球菌2型三种毒力因子。

分类号： S852.611

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