芥菜新型几丁质酶基因在酵母（Pichia pastoris）中的分泌表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 欧阳石文

作者： 欧阳石文;赵开军;冯兰香;谢丙炎

作者机构：

关键词： 酵母;基因表达;BjCHIl基因;几丁质酶

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1006-1304

年卷期： 2002 年 10 卷 1 期

页码： 33-35

收录情况： CSCD

摘要： BjCHIl基因是从芥菜（Brassica juncea）中克隆的1个新型几丁质酶基因，编码含2个几丁质结合域的几丁质酶。本研究曾试图在大肠杆菌中表达该基因而未成功，因此试在酵母中表达。 按照BjCHIl cDNA全序列设计特异引物，通过PCR扩增获得成熟肽第1密码子至最后密码子之间的片段，克隆到载体pPIC9K上，测序验证无误后，转化酵母KM71。获得6个抗1.0 mg/mL遗传霉素（G418）水平的阳性转化子。PCR鉴定表明外源基因已经整合到酵母染色体上。此6个菌株经初步诱导，均表达出预期的蛋白质。对其中表达效率相对较好的KM71-17-1菌株作进一步的诱导表达，结果表明在诱导第3天后产生的外源蛋白达最大值。至此，成功地获得了BjCHIl蛋白，为进一步研究奠定了基础。

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