来源于Escherichia coli的高比活植酸酶基因的高效表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 罗会颖

作者： 罗会颖;姚斌;袁铁铮;王亚茹;史秀云;伍宁丰;范云六

作者机构：

关键词： 高比活植酸酶;基因改造;毕赤酵母;高效表达

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2004 年 20 卷 01 期

页码： 78-84

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 高效表达高比活植酸酶是进一步提高植酸酶发酵效价、降低植酸酶生产成本的一个有效途径。对源于Escherichiacoli的高比活植酸酶基因appA ,按照毕赤酵母 (Pichiapastoris)密码子的偏爱进行了密码子优化改造。该改造后的基因appA m按正确的阅读框架融合到毕赤酵母表达载体pPIC9上的α 因子信号肽编码序列 3′端 ,通过电击转化得到重组转化子。对重组毕赤酵母的Southernblotting分析证实植酸酶基因已整合到酵母基因组中 ,并确定了整合基因的拷贝数。Northernblotting分析证实植酸酶基因得到了正常转录。SDS PAGE分析和表达产物的研究表明 ,植酸酶得到了高效分泌表达 ,在 5L发酵罐中植酸酶蛋白表达量达到 2 5mg mL发酵液 ,酶活性 (发酵效价 )达到 7 5× 10 6 IU mL发酵液以上 ,大大高于目前报道的各种植酸酶基因工程菌株的发酵效价。

分类号： Q786

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