一种降低dATP用量的简单易错PCR方法

文献类型： 中文期刊

第一作者： 高义平

作者： 高义平;赵和;吕孟雨;孙果忠;杨学举;王海波

作者机构：

关键词： 易错PCR;体外诱变;碱基突变;序列变异;洋葱抗菌蛋白基因;Bt基因

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2014 年 54 卷 01 期

页码： 97-103

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 易错PCR是基因体外诱变的主要方法之一,是通过在PCR体系中添加Mn2+、提高Mg2+浓度和dCTP/dTTP浓度等措施达到基因诱变的目的。【目的和方法】本研究在不添加Mn2+、不调整其它任何PCR成分的情况下,通过降低dATP浓度的底物不平衡作用,对洋葱抗菌蛋白基因Ace-AMP1和苏云金芽胞杆菌毒蛋白(Bt)基因cry1A(c)进行了PCR诱变。【结果】结果表明:随着dATP浓度的降低,序列变异率和碱基突变率均呈升高趋势。当dTTP/dCTP/dGTP∶dATP在20∶1-40∶1时,碱基突变率介于1.4%-1.8%之间,序列变异率介于77.8%-100%之间。【讨论和结论】该方法简化了常规易错PCR诱变中的条件优化过程,简单实用。降低dATP浓度的诱变方法主要引起AT→GC的变异,适用于提高靶基因GC含量的体外诱变。本研究降低单一底物浓度的诱变方法可以提高诱变基因的AT或GC含量,是对易错PCR诱变方法的拓展。

分类号： Q503

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