弓形虫sod3基因缺失株的构建及其基本生物学功能研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵丹钰

作者： 赵丹钰;李婷婷;王萌;祁淑芸;梁勤立;张芝玮;朱兴全;王金磊

作者机构：

关键词： 弓形虫;氧化应激;超氧化物歧化酶(SOD);CRISPR-Cas9;生物学功能

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2022 年 52 卷 007 期

页码： 882-891

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 超氧化物歧化酶(SOD)是一种重要的抗氧化酶,参与一系列重要的细胞过程,可保护机体免受氧化损伤,在寄生虫氧化还原平衡调节中发挥重要作用.本研究利用CRISPR-Cas9介导的同源重组技术,分别构建了弓形虫Ⅰ型RH虫株和Ⅱ型Pru虫株的sod3基因缺失株(RH△sod3;Pru△sod3);通过体内和体外试验,探究了sod3基因的基本生物学功能及其在小鼠体内的毒力作用.噬斑试验分析表明,RH△sod3和Pru△sod3所形成噬斑的大小和数量与野生株相比无显著差异(P>0.05).研究发现缺失sod3基因不影响弓形虫RH速殖子在体外的入侵效率、细胞内复制能力、逸出能力、活性氧(ROS)水平、总抗氧化能力(T-AOC).缓殖子转化试验发现,缺失sod3基因不影响弓形虫Pru虫株由速殖子向缓殖子转化.小鼠毒力试验表明,分别单独感染100个RH△sod3和RH野生株速殖子的昆明鼠均在感染后第8~10天发生死亡;分别单独感染5×105个Pru△sod3和Pru野生株速殖子的昆明鼠均在感染后10 d内发生死亡;分别单独感染5×103个Pru△sod3和Pru野生株速殖子的昆明鼠所形成的脑包囊数量无显著差异(P>0.05).对弓形虫转录组数据库现有数据分析表明,SOD3在弓形虫孢子化卵囊阶段的表达量显著高于其他时期,说明SOD3可能参与卵囊孢子化过程.本研究成功构建了弓形虫sod3基因缺失株(RH△sod3;Pru△sod3),为进一步研究sod3基因在Ⅰ型和Ⅱ型虫株的其他生物学功能奠定了基础.

分类号： S852.729

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