猪C型凝集素受体8A骆驼单域抗体酵母展示文库的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 魏国燕

作者： 魏国燕;李坤;卢曾军;刘在新;孙普;白兴文;李冬;陈应理;包慧芳;李平花;付元芳;张婧;马雪青;曹轶梅

作者机构：

关键词： 猪CLEC8A基因;骆驼单域抗体;酵母展示文库;流式细胞术

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2018 年 01 期

页码： 177-182

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为构建猪C型凝集素受体8A(C-type lectin domain family 8,member A,CLEC8A)的单域抗体酵母展示文库,本文首先克隆出了猪CLEC8A基因编码区序列。通过SMART软件分析,鉴定出该受体胞外区基因序列,并插入原核表达载体pET28a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出了猪CLEC8A胞外区蛋白。表达的蛋白经201佐剂乳化后免疫双峰驼,间接ELISA监测抗体滴度,于六免后15d分离骆驼外周血淋巴细胞。提取总RNA,反转录成cDNA后经巢式PCR扩增获得骆驼VHH基因。纯化的VHH片段与线性化的pCTCON2载体混合后共转入酿酒酵母感受态细胞(EBY100),经细胞内同源重组,成功制备了针对猪CLEC8A受体的骆驼单域抗体酵母展示文库。经菌落计数及测序鉴定结果表明,文库大小约为1.6×107,文库重组率达90%,文库多样性丰富。流式细胞术初步鉴定酵母细胞表面成功展示出抗猪CLE8A的单域抗体,为后续文库筛选奠定基础。

分类号： S852.4

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