文献类型： 中文期刊
第一作者： 闫鸣昊
作者： 闫鸣昊;郝军红;张大俊;申超超;徐国伟;侯景;张克山;郑海学;刘湘涛
作者机构：
关键词： CRISPR/Cas9;TPL2基因;HEK293T细胞;基因敲除;塞内卡病毒
期刊名称： 中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2020 年 009 期
页码： 1073-1082
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 肿瘤进展位点2 (TPL2)在不同病毒感染过程中扮演着不同角色.为探究TPL2对塞内卡病毒(SVA)复制的影响,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建TPL2基因敲除HEK293T细胞系,以PCR测序和Western-blot对TPL2敲除效率进行双重鉴定,同时检测TPL2缺失对细胞形态和细胞增殖速度的影响.最后,用SVA感染细胞,采用IFA、RT-qPCR、Western-blot和TCID50方法检测病毒增殖水平,综合评价TPL2敲除对SVA复制的影响.结果,获得两株敲除TPL2基因的HEK293T细胞.随机选取B1细胞株(HEK293T-TPL2-/-)进行后续功能评价,发现TPL2敲除后细胞的增殖速度与对照HEK293T细胞无显著差异,均为贴壁、上皮样细胞形态.SVA感染后与对照细胞相比,敲除TPL2基因显著增加病毒拷贝数,病毒mRNA的转录,病毒蛋白的翻译以及子代病毒的毒力.综上所述,本研究成功建立TPL2基因敲除HEK293T细胞系并证明TPL2在SVA感染过程中发挥着抗病毒作用,为进一步揭示TPL2相关免疫反应和SVA感染过程的具体作用机制奠定试验基础并提供良好的细胞模型,也为疫苗生产过程中提高病毒产量提供一种可行性策略.
分类号： S852.65
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