工程菌P.pastoris GS115(pPIC9K-lac2)的构建及诱导表达漆酶的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 沈锦城

作者： 沈锦城;张泽华;杨穗珊;张添元;罗进贤;张爱联

作者机构：

关键词： 漆酶;枯草芽孢杆菌;基因表达;P.pastoris;发酵;高密度发酵

期刊名称： 工业微生物

ISSN： 1001-6678

年卷期： 2013 年 43 卷 01 期

页码： 36-40

收录情况： CSCD

摘要： 用PCR法扩增枯草芽孢杆菌的漆酶基因lac2。构建表达质粒pPIC9K-lac2。通过电转法将lac2基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性和高表达漆酶的转化子作为工程菌GS115(pPIC9K-lac2)。在发酵罐中发酵GS115(pPIC9K-lac2)表达重组蛋白。在50 L发酵罐中加入20 L无机盐发酵培养基。在发酵的第一阶段连续24 h补加50%甘油-0.8%PTM4增殖P.pastoris,然后用甲醇-0.8%PTM4诱导49 h。在发酵过程中,通过调节搅拌的频率和通气量,将溶氧维持于20%～30%,用氨水维持pH 5.0.放罐时生物量为A_(600)=266.5,表达漆酶1097.5U/L发酵液。

分类号： Q93

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